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肿瘤坏死因子elisa试剂盒操作步骤
发布时间:2017-05-19   点击次数:779次
肿瘤坏死因子elisa试剂盒操作步骤如下:
 
1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。
 
2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
 
3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。
 
4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
 
5、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
 
6、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液50μL,空白对照孔不加。
 
7、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
 
8、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
 
9、显色:每孔先加入显色剂A液50μL,再加入显色剂B液50μL,平板混匀器混匀30s(或用手轻轻震荡混匀30s),37℃避光显色15min。
 
10、终止:取出酶标板,每孔加终止液50μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。
 
11、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。
 
12、计算:根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用App来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

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