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人端粒酶(TE)检测原理!
发布时间:2021-10-18   点击次数:139次

人端粒酶(TE)检测原理!

端粒酶(Telomerase),在细胞中负责端粒的延长的一种酶,是基本的核蛋白逆转录酶,可将端粒DNA加至真核细胞染色体末端,把DNA复制损失的端粒填补起来,使端粒修复延长,可以让端粒不会因细胞分裂而有所损耗,使得细胞分裂的次数增加。

产品名称:人端粒酶(TE)ELISA检测试剂盒

产品规格:96T

储存条件:2-8℃,避光防潮保存

有效期:6个月

检测原理:

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人端粒酶(TE)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人端粒酶(TE)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

实验步骤(仅供参考)

1.  从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

3.  待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;

4.  随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

试剂盒性能:

1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。

2. 灵敏度:zui低检测浓度小于0.1 ng/ml。

3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性:板内变异系数小于10%、板间变异系数小于15%。


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