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上海信帆生物进行酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)常识培训
发布时间:2013-05-29   点击次数:1701次

上海信帆生物进行酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)常识培训

大家在做elisa实验的时候,难免会遇到不同的问题,比如标准曲线不好,试剂盒的

回收率,假阴性,假阳性,实验的重复性不好等等。现在大家就来一一解答用户朋友们在实验过程中遇到的各种疑问!
 
曲线问题:
 
1.OD值不正常:试剂盒未回温,试剂盒回温到25℃
                            温度控制不好,控制正确温度
                           孵育时间不准确,控制孵育时间
                          洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增 加,洗涤4-5次,每
孔250ul,然后拍干
                        阳光直射,对着风直接吹,避风避光
                        酶标仪的波长错误,酶标仪的波长450nm
                       抗体的稀释错误,正确的稀释抗体
                        水质问题,用娃哈哈矿泉水代替
 
2.白   板:洗涤液配制错误,正确的配制洗涤液
             少加液体(错加液体),正确的步骤加液体
           
 
3.无 梯 度:标准品也污染,换标准品点板
                     OD值不正常,控制温度时间在做一次
                    人为点板,不要点板/
4.线 性 不 好:OD值不正常,控制温度时间在做一次
                         
 
回收率:

1.空白管阳性高:样本本身就是阳性样本,换阴性样本做回收率
                             空白管在实验中被污染,实验中防止交叉污染
                           水质原因用,娃哈哈矿泉水代替
 
 
2.偏  高:添加量不准确,的添加量
          添加浓度不适合,添加合适的浓度
           取液吹干量多,准确的取液吹干
           取到其它相层液体,取需用相吹干
           复溶液未稀释或加入量少,正确的稀释复溶液
 
3.偏  低:添加量不准确,的添加量
          添加浓度不适合,添加合适的浓度
          取液吹干量少,准确的取液吹干
           复溶液稀释错误或加入量多,正确的稀释复溶液
          

 
 
假阴、阳性:
1,水质原因:点复溶液验证,用娃哈哈矿泉水代替
2,实验操作原因: 汲取到其它相吹干,准确的取液吹干
                  离心不彻底,延长离心时间
                  样本的污染,更换样本
                  乳化未处理完全,温浴(70℃)处理乳化现象
3,仪器试剂原因:离心管未清洗干净,正确的洗涤器具
                  有机溶剂的影响,做试剂空白看影响结果
4,衍生化试剂原因(长时间衍生化试剂变质),更换衍生化试剂
5,与曲线好坏相关,,保证曲线的正常
 
 
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